Analysis of the endometrial transcriptome at the time of implantation in women receiving a single post-ovulatory dose of levonorgestrel or mifepristone

Abstract Background: Levonorgestrel (LNG) is a progesterone receptor agonist used in both regular and emergency hormonal contraception; however, its effects on the endometrium as a contraceptive remain widely unknown and under public debate. Objective: To analyze the effects of LNG or mifepristone (MFP), a progesterone receptor antagonist and also known as RU-486, administered at the time of follicle rupture (FR) on endometrial transcriptome during the receptive period of the menstrual cycle. Methods: Ten volunteers ovulatory women were studied during two menstrual cycles, a control cycle and a consecutively treated cycle; in this last case, women were randomly allocated to two groups of 5 women each, receiving one dose of LNG (1.5 mg) or MFP (50 mg) the day of the FR by ultrasound. Endometrial biopsies were taken 6 days after drug administration and prepared for microarray analysis. Results: Genomic functional analysis in the LNG-treated group showed as activated the bio-functions embryo implantation and decidualization, while these bio-functions in the T-MFP group were predicted as inhibited. Conclusions: The administration of LNG as a hormonal emergency contraceptive resulted in an endometrial gene expression profile associated with receptivity. These results agree on the concept that LNG does not affect endometrial receptivity and/or embryo implantation when used as an emergency contraceptive.

Astemizole, an inhibitor of ether-à-go-go-1 potassium channel, increases the activity of the tyrosine kinase inhibitor gefitinib in breast cancer cells

Abstract Background Expression and activity of the potassium channel ether-à-go-go-1 (EAG1) are strongly related to carcinogenesis and tumor progression, which can be exploited for therapeutic purposes. EAG1 activity may be reduced by preventing its phosphorylation with epidermal growth factor receptor (EGFR) kinase inhibitors and by astemizole, which blocks the channel pore and downregulates its gene expression. Objective We aimed to study the potential cooperative antiproliferative effect of the EGFR inhibitor gefitinib and the EAG1-blocker astemizole, in breast cancer cells. Materials and Methods The cells were characterized by immunocytochemistry. Inhibitory concentrations were determined by non-linear regression analysis using dose-response curves. The nature of the pharmacological effect was evaluated by the combination index equation while cell cycle analysis was studied by flow cytometry. Results Astemizole and gefitinib inhibited cell proliferation in a concentration-dependent manner, with inhibitory concentrations (IC 50) values of 1.72 µM and 0.51 µM, respectively. All combinations resulted in a synergistic antiproliferative effect. The combination of astemizole and gefitinib diminished the percentage of cells in G2/M and S phases, while increased accumulation in G0/G1 of the cell cycle. Conclusions Astemizole and gefitinib synergistically inhibited proliferation in breast cancer cells expressing both EGFR and EAG1. Our results suggest that the combined treatment increased cell death by targeting the oncogenic activity of EAG1.

Mecanismos de acción de la anticoncepción hormonal de emergencia: efectos del levonorgestrel anteriores y posteriores a la fecundación / Mechanisms of action of emergency contraception

El mecanismo de acción del levonorgestrel (LNG) como anticonceptivo de emergencia (AE) es aún controvertido. Para quienes consideran que el embarazo inicia antes de la implantación, todo compuesto capaz de interferir con etapas posteriores a la fecundación y anteriores a la implantación se considera abortivo. Investigaciones previas sugieren que en seres humanos este método actúa también después de la fecundación. Sin embargo, en la actualidad existe sólida evidencia que demuestra que los efectos anteriores a la fecundación son en realidad los que explican la acción anticonceptiva del LNG. En este artículo se revisa la evidencia acumulada sobre los mecanismos de acción propuestos. Los consensos derivados de la información disponible establecen que los mecanismos prefecundación (inhibición o retardo de la ovulación) son los que explican la efectividad anticonceptiva de los AE de progestina sola.

There is still controversy regarding the mechanism of action of levonorgestrel (LNG) for emergency contraception (EC). For those who state that pregnancy starts prior to implantation, any compound able to interfere with post-fertilization and pre-implantation stages, should be considered as abortifacient. Previous research suggests that EC in humans acts predominantly after fertilization. Current evidence with LNG-only EC supports a pre-fertilization mechanisms to explain its action. There are many potential mechanisms of action, which could vary pending on the day during the fertilization window of the ovarian cycle at which the contraceptive is given. This paper reviews the evidence for each potential mechanism of action. According to the most recently statements, it is concluded that the primary and possible the only mechanism of action of LNG-only EC is preventing or delaying ovulation.

Sitios de acción inhibitoria de la prolactina sobre la síntesis de estradiol inducida por la hormona folículo estimulante en las células de la granulosa / Sites of prolactin inhibition on gonadotropin-induced estrogen production in cultured rat granulosa cells

En este estudio se investigaron los sitios probables de la acción inhibitoria de prolactina (Prl) sobre la esteroidogénesis ovárica inducida por la hormona folículo estimulante (FSH). Para esta finalidad se estudió la capacidad de cultivos primarios de células de la granulosa de la rata de sintetizar estradiol y AMPc bajo la estimulación con FSH o de activadores de la vía dependiente de AMPc en presencia de Prl humana. La participación de otros sistemas de transducción de señal como los dependientes de PKC y proteínas Gi en los mecanismos de acción inhibitoria de la Prl fue también investigada utilizando inhibidores de estos sistemas como la calfostina C y la toxina pertusis. Los resultados demostraron la habilidad de la Prl de alterar la esteroidogénesis previa y posterior a la generación de AMPc, muy probablemente por mecanismos que involucran la activación de la subunidad catalítica de la adenilato ciclasa, así como a través de interactuar con sistemas de transducción de señal dependientes de PKC y proteínas sensibles a la toxina pertusis. Nuestros resultados sugieren un mecanismo de interacción entre receptores acoplados a proteínas G con aquéllos acoplados a cinasas de tirosinas mediado muy probablemente por vías de señalización dependientes de proteínas Gi.

We studied the sites of prolactin inhibition upon FSH induced ovarian steroidogenesis and the ability of prolactin (Prl) to inhibit the synthesis of estradiol and cAMP accumulation under the stimulation of FSH or cAMP dependent activators. The participation of other signal pathways such as PKC and Gi proteins on the inhibitory actions of Prl was also investigated using calfostine C andpertusis toxin as inhibitors. Results showed a dose dependent prolactin decrease in FSH-induced estradiol and cAMP production prior and after the generation of the cyclic nucleotide by a mechanism involving the catalytic subunit of adenyl cyclase and/or through activation of PKC or by the interaction with pertusin toxin sensitive G proteins. Our results suggest a mechanism by which G protein coupled receptors are linked with those coupled with tyrosine kinase through the involvement of a Gi protein mediated mechanism.

Differential effects of glycosylated and non-glycosylated porcine prolactin on estradiol and progesterone secretion by rat granulosa cells in culture

Background. The objetive was to better understand the interactions between prolactin and ovarian function. Methods. The effects of two variants of porcine prolactin (pPRL) on estradiol (E2) and progesterone (P4) production by rat granulosa cells in culture were studied using granulosa cells obtained from large preovulatory follicles of pregnant mare serum gonadotropin (PMSG)-treated immature Sprague-Dawley rats. Cultures were performed in the absence or presence of hCG (0.1 IU/ml) and different concentrations of either glycosylated and non-glycosylated (g-pPRL and ng-pPRL, respectively) pPRL. Results. Dose-response studies showed that maximal stimulation occurred in all instances with g-pPRL at the dose of 10 ng/mL during the 72-h treatment period. In the case of E2 the maximal response was obtained in hCG-stimulated cultures, whereas the response of P4 was higher in cultures stimulated with g-pPRL in the absence of hCG. In a similar manner, the non-glycosylated form of pPRL increased, although to a lesser extent, the secretion of P4 only in those cultures incubated in the absence of hCG. In contrast to these observations, ng-pPRL was about twice as active than the glycosylated form on the stimulation of growth of Nb2 lymphoma cells. Conclusions. These data point out that glycosylation is involved in the differential effects of pPRL on ovarian steroidogenesis and support the role of carbohydrates in the structural-functional polymorphic nature of the hormone

Biologically active steroid and thyroid hormones stimulate secretion of sex hormone-bending globulin by human term placenta in culture

In this study, the influence of steroid and thyroid hormones and epidermal growth factor on the productin of SHBG by placenta tissue explants was investigated. Explants of trophoblastic tissue obtained from normal term placentas were cultured for 48 h in serum free culture medium, and then for an additional 24 h period in the presence or absence of various concentrations of either estradiol (0.25 - 5 nM), testoterone (0.5 - 500 nM), triiodothyronine (0.01 - 100 nM) or EGF (2-40 µM), respectively. Human SHBG concentration in culture media was estimated on each day by specific two-site time-resolved fluoroimmunometric assay and the results expressed as pmol/mg tissue protein. Binding characteristics and molecular structure of secreted SHBG were determined by [3H]5a-DHT binding assays and Western blot analysis, espectively. Estradiol and triidothyronine but not testoterone increased significantly (p<0.05 vs. control) the secretion of SHBG into the culture media. Addition of EGF did not significantly change the production of SHBG at the various concentrations studied. [3H]5a-DHT binding assays and Western blot analysis of placental SHBG resulted in identical binding affinities (Kd 2.0 ñ 0.16 x 10-9M= and molecular structure to those obtained in serum from normal pregnant women. These findings support and extend previous observations by our laboratory indicating that SHBG gene is expressed in the placenta and provide further evidence on the hormonal regulatory characteristics of this steroid-binding protein in cultured placenta

Fasting and postprandial serum insulin in Mexican adolescents with menstrual disorders

Objetivo. Investigar las concentraciones séricas de insulina en condiciones basales y dinámicas en un grupo de adolescentes mexicanas caracterizadas por tener alteraciones mestruales. Métodos. Se estudiaron 77 adolescentes pospuberables: 65 de ellas, con edad promedio de 15 ñ 1.7 años, presentaban ciclos anovulatorios caracterizados por periodos mestruales con duración menor de 20 días o mayor de 45 días, y el grupo control consistió de 12 adolescentes (15 ñ 1.2 años de edad) clínicamentes sanas, con ciclos ovulatorios y sangrados endometriales normales. En todas las sujetos se obtuvieron las siguientes características clínicas: índice de masa corporal, relación cintura/cadera, presencia y severidad de acné, hirsutismo, acantosis nigricans e hiperkeratosis folicular. Se realizaron estudios de ultrasonido transabdominal de la región pélvica, así como determinaciones de suero de LH, FSH, estradiol, prolactina, testosterona, androstendiona y de la globulina transportadora de esterioides sexuales (SHBG). En todas se midió en sangre venosa la glucosa e insulina en condiciones pre y posprandiales. Resultados. Las jóvenes anovulatorias se subdividieron en tres grupos dependiendo de la presencia de acantosis nigricans y sobrepeso. Se observaron concentraciones de insulina significativamente más elevadas en los grupos con anovulación que en los controles. Las concentraciones de insulina en las anovulatorias correlacionaron con la presencia y gravedad de acantosis, la relación cintura/cadera, el índice de peso corporal y las concentraciones circulantes de SHBG. Conclusiones. Los resultados de este estudio indicaron una importante correlación entre las concentraciones en suero de la insulina y la presencia de alteraciones de la función ovárica (anovulación en adolescentes mexicanas. Estos hallazgos sugieren a la hiperinsulinemia como un marcador predictivo de anovulación crónica y de alteraciones metabólicas en la vida adulta; sin embargo, estas observaciones requieren de mayor investigación

Immediate effects of intermitent administration of domperidone upon prolactin release in normal women

El presente, estudio fue llevado a cabo con la finalidad de investigar el efecto de la administración repetida del antagonista dopaminérgico domperidone (DOM) sobre la secreción de prolactina, así como la respuestas de esta hormona a la administración de la hormona liberadora de tirotrofina (TRH) durante el efecto máximo del antagonista. Se estudiaron 9 mujeres normales durante la fase folicular del ciclo menstrual, las cuales fueron divididas en 3 grupos de acuerdo al siguiente diseño: I. Administración repetida de DOM (10 mg cada 60 minutos por 3 horas), seguida de un bolo i.v. de TRH (200 ug). II. Bolos intermitentes de DOM (10 mg cada 60 minutos por 2 horas), seguidos de TRH, 200 ug. i.v. al tiempo de la tercera inyección del DOM, y III. Bolos intermitentes de DOM (10 mg/hora por 3 horas), seguidas de 10 mg i.v. de metoclopramida al momento de la última dosis de DOM, así como de 200 g de TRH administrados 90 minutos después del bolo de DOM + metoclopramida. Las concentraciones plasmáticas de PRL inmunorreactiva fueron cuantificados antes y a intervalos de 15 a 30 minutos durante los experimentos. Treinta minutos después del primer bolo de DOM, todos los sujetos mostraron un incremento significativo en las concentraciones séricas de prolactina (PRL); posteriormente, dichas concentraciones disminuyeron progresivamente a pesar de bolos adicionales del antagonista. Igualmente, la administración de metoclopramida al tiempo de la refractariedad hipofisiaria al DOM, fue incapaz de incrementar las concentraciones séricas de PRL. Todos los sujetos respondieron a TRH sin importar el momento de la inyección, las concentraciones séricas de PRL presentes o las manipulaciones farmacológicas precedentes (administración de DOM y/o metoclopramida). La cinética de liberación de PRL durante estas manipulaciones farmacológicas pudieran ser explicadas por el efecto agonista-antagonista del DOM sobre la secreción del lactotropo. Más aún, la presencia de una respuesta a significativa a TRH durante períodos de refractariedad al DOM, sugiere la existencia de 2 pozas de PRL en el lactotropo humano, una de ellas regulada por dopamina en tanto que la segunda por un factor liberador de PRL y/o por TRH

Efecto de la prolactina sobre la función del eje hipotálamo-hipófisis testículo endiferentes estadios de la maduración sexual de la prata / Effects of chronic-induced hyperprolactinemia on the rat hypothalamic-testicular axis through sexual maturation

En este estudio se investigó el efecto de la elevación inducida de prolactina circulante sobre el eje hipotálamo-hipófisis-testículo de la rata macho. La inducción de la hiperprolactinemia se realizó por medio del transplante de dos glándulas hipofisiarias de ratas hembras, a la cápsula renal izquierda de ratas macho intactas. Se utilizaron 3 diferentes grupos de estudio dependiendo de la edad de los animales al tiempo del transplante. Grupo I: Ratas inmaduras (18 días), Grupo II: Ratas pospuberales (41 días) y Grupo III: Ratas adultas (63 días). Un mes posterior a la fecha del transplante, los animales fueron sacrificados obteniéndose inmediatamente la sangre periférica, el tejido testicular y los epidídimos. Los resultados mostraron una elevación significativa de las concentraciones de prolactina circulante en todos los grupos estudiados. Las determinaciones de LH y FSH en sangre mostraron una inhibición significativa de LH en ratas de 63 días sin cambios aparentes en ratas de 18 y 41 días de edad. Las concentraciones en suero de FSH no mostraron diferencias significativas con respecto a los grupos control. La cuantificación de testosterona en ratas hiperprolactinémicas de los grupos I y II mostró valores más elevados que los observados en ratas control de la misma edad; sin embargo, en ratas hiperprolactinémicas de 63 días los niveles de testosterona fueron menores que los obtenidos en ratas no transplantadas. El contenido de ABP en los epidídimos de ratas hiperprolactinémicas de 18 y 41 días fue menor que el observado en epidídimos de ratas control, sin cambios significativos en ratas de 63 días de edad. Los resultados de este estudio permiten establecer diferencias en los efectos de prolactina sobre la dinámica gonadotrópica y testicular de la rata, sugiriendo un efecto específico a nivel del testículo dependiendo del estadío de maduración sexual de los animales